This post is also available in: English (Angleščina) Slovenščina

Diagnostika prionskih bolezni temelji na imunohistokemijskem določanju ob uporabi proti­teles proti prionskemu proteinu (PrP), ki ne razlikujejo med celično obliko PrP (PrP^C) in patološko izoobliko (PrP^Sc). Zato zahteva ta metoda močne predobdelave za odstranjevanje PrP^C in razkrivanje epitopa na PrP^Sc v parafinskih rezinah umrlih za prionsko boleznijo.

Namen naše naloge je bil testirati monoklonska protitelesa proti PrP^Sc (MPt) V5B2, K4B3, A4/5 in E5/9, ki so jih pripravili na Zavodu RS za transfuzijo krvi, jih primerjati s kontrolnimi, komercialno dostopnimi MPt 3F4 in 6H4, ter poiskati enostavnejšo predobdelavo za razkrivanje epitopa na PrP^Sc.

Parafinske histološke rezine vzorcev možgan štirih umrlih za sporadično Creutzfeldt-Jakobovo boleznijo (sCJB) in dveh umrlih primerljive starosti, ki nista imela CJB, smo obdelali s prilagojeno standardno imunohistokemijsko metodo avidinbiotin kompleks (ABC) ob upo­rabi naših MPt, kontrolnih MPt in štirih predobdelav. Imunohistokemijsko reakcijo (IHR) z našimi MPt in PrP^Sc smo primerjali z IHR med kontrolnima MPt (3F4 in 6H4) in PrP^Sc z ozi­rom na jakost signala IHR in število pozitivnih reakcij. Ista MPt smo uporabili tudi na zaledenelih rezinah vzorcev dveh ne-CJB-možgan brez kakršnekoli predobdelave.

V nalogi smo pokazali, da so vsa štiri testirana MPt specifična za PrP^Sc, saj za razliko od dveh kontrolnih MPt niso prikazala PrP^C v zaledenelih rezinah svežih ne-CJB-možgan. Prav tako smo pokazali, da se z močnejšimi predobdelavami histoloških rezin IHR izboljša, tako v jakosti kot tudi v številu pozitivnih reakcij (p < 0,05). Naše MPt V5B2 je občutljivejše od kontrolnega MPt 3F4 (p = 0,03) in je zmožno z manj intenzivno predobdelavo zanesljivo označiti PrP^Sc v možganih obolelih za CJB.

Z omenjenimi rezultati smo dokazali specifičnost vseh naših MPt za PrP^Sc. Pokazali smo, da se ta MPt med seboj razlikujejo po občutljivosti in da je za diagnostiko sCJB najbolj pri­merno MPt V5B2, primernejše tudi od dveh kontrolnih MPt. Domnevamo, da je MPt V5B2 primerno za izdelavo testov za dokazovanje PrP^Sc v zaledenelih rezinah potencialno okuže­nih tkiv ali pa v telesnih tekočinah.